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http://www.tede2.ufrpe.br:8080/tede2/handle/tede2/9683
Tipo do documento: | Tese |
Título: | Determinantes genéticos de resistência a antimicrobianos em Staphylococcus spp. e bactérias da família Enterobacteriaceae isolados de leite de vacas e cabras com mastite subclínica em ecossistemas agropecuários do Nordeste brasileiro |
Autor: | ORTEGA SIERRA, Tania Alexandra ![]() |
Primeiro orientador: | MOTA, Rinaldo Aparecido |
Primeiro coorientador: | PEIXOTO, Rodolfo de Moraes |
Primeiro membro da banca: | PINHEIRO JUNIOR, José Wilton |
Segundo membro da banca: | Carvalho FERNANDES, Artur Cezar de |
Terceiro membro da banca: | SILVA, José Givanildo da |
Quarto membro da banca: | SANTOS, André de Souza |
Resumo: | Objetivou-se estudar o perfil fenotípico e genético de resistência aos antimicrobianos em bactérias do gênero Staphylococcus e enterobactérias isoladas de leite cru de vacas e cabras no estado de Pernambuco. Foram coletadas amostras de leite de 426 vacas e 323 cabras em 6 e 17 propriedades leiteiras bovinas e caprinas, respectivamente. As amostras de leite das vacas e cabras foram semeadas em ágar sangue ovino e incubadas a 37°C por até 48 horas. Colônias que se apresentaram como cocos Gram positivos foram submetidas ao teste de catalase para a identificação de Staphylococcus spp. e posteriormente submetidos à Reação em Cadeia da Polimerase (PCR) para identificação. As bactérias Gram negativos foram identificadas utilizando provas bioquímicas padrão. Os isolados de bovinos e caprinos identificados foram: 16,9% (45/267) S. aureus, 13,1% (35/267) S. epidermidis, 12,7% (34/267) S. haemolyticus e 19,5% (52/267) S. chromogenes, enquanto que 37,8% (101/267) não foram classificadas dentre dessas espécies. Vinte e seis isolados de leite de vaca foram identificados como Escherichia coli (53,9% [14/26]), Proteus mirabilis (15,4% [4/26]), Klebsiella spp. (26,9% [7/26]) e Citrobacter spp. (3,9% [1/26]), as quais foram submetidas a um teste de triagem para identificação de bactérias produtoras de β-lactamases de espectro estendido (BLEE) e à prova confirmatória Teste de Disco Duplo (DDT), utilizando cefotaxima (30μg), ceftriaxona (30μg), ceftazidina (30μg) e amoxicilina com ácido clavulânico (30μg). Dos 26 isolados de enterobactérias, 61,5% (16/26) foram positivos no teste de triagem para BLEE e 12,5% (2/16) foram positivos no DDT. Posteriormente, os 26 isolados foram analisados para os genes codificadores de BLEE, blaSHV e blaTEM, sendo que 53,9% (14/26) positivos para um ou os dois genes e 71,4% (10/14) foram identificados como Escherichia coli. Por outro lado, foram identificados 148 e 119 isolados de Staphylococcus spp. de vacas e cabras, respectivamente, para o estudo do perfil fenotípico de resistência na técnica de difusão em ágar com os discos de antibióticos: penicilina (10UI), tetraciclina (30μg), cefoxitina (30μg), eritromicina (15μg), Clindamicina (2μg) e ceftiofur (30μg). Nos isolados de bovinos observou-se expressiva frequência de resistência à penicilina (52,0% [77/148]), seguido da tetraciclina (10,1% [15/148]), e nenhum isolado foi resistente ao ceftiofur. Em relação aos determinantes genéticos de resistência, o padrão mais observado foi a presença do gene blaZ (40,5% [60/148]) e do gene tetK (14,9% [22/148]). Nos isolados de cabras observou-se padrão semelhante de resistência com a frequência de resistência à penicilina e à tetraciclina de 45,0% (53/119) e 30,3% (36/119), respectivamente. Em relação aos genes de resistência observou-se uma maior frequência do gene blaZ com 50,4% (60/119) e tetK com 45,0% (53/119). Nos Staphylococcus spp. de ambas espécies foi realizada o D – teste para identificar cepas capazes de induzir resistência à lincosamidas e estreptogramina, utilizando-se discos de eritromicina (15 μg) e clindamicina (2 μg). Nos isolados de Staphylococcus spp. de vacas obteve-se 0,7% (1/148) de D – teste positivo, 7,4% (11/148) foram resistentes aos MLS, 1,4% (2/148) apresentaram resistência somente aos MS e 2,0% (3/148) foram resistentes à clindamicina (L+). Para os isolados de cabras obteve-se 3,4% (4/119) D - teste positivo, 0,8% (1/119) foi resistente aos MLS e 0,8% (1/119) ao L+. Os resultados obtidos demonstram a circulação de cepas resistentes aos antimicrobianos no sistema agropecuário do estado de Pernambuco, representando um risco à saúde animal e pública. |
Abstract: | It was aimed to study the phenotypic and genetic profile of antimicrobial resistance in bacteria of the Staphylococcus genus and Enterobacteriaceae family isolated from raw cow and goat’s milk in the state of Pernambuco. Milk samples were collected from 426 cows and 323 goats, in 6 and 17 bovine and goat dairy farms, respectively. All milk samples were inoculated into base agar with 5% ovine blood and incubated at 37°C for up to 48 hours. Colonies that presented microscopic morphology of Gram positive cocci were submitted to the catalase test for the identification of Staphylococcus spp. and subsequently submitted to PCR for identification. Gram negative bacteria were identified using biochemical tests. Among bovine and caprine isolates, 16.9% (45/267) S. aureus, 13.1% (35/267) S. epidermidis, 12.7% (34/267) S. haemolyticus and 19.5% (52/267) S. chromogenes were identified, while 37.8% (101/267) were not positive for the tested species. Twenty-six cow milk isolates were identified as Escherichia coli (53.9% [14/26]), Proteus mirabilis (15.4% [4/26]), Klebsiella spp. (26.9% [7/26]) and Citrobacter spp. (3.9% [1/26]). All the isolates were submitted to a screening test to identify BLEE (extended spectrum β-lactamase) -producing bacteria and confirmatory test (Double disc test), using cefotaxime (30 μg), ceftriaxone (30 μg), ceftazidine (30 μg) and amoxicillin with clavulanic acid (30 μg). Of the 26 enterobacteria isolates, 61.5% (16/26) were positive in the BLEE screening test and 12.5% (2/16) were positive in the DDT. Subsequently, all 26 isolates were analyzed for the BLEE-encoding genes, blaSHV and blaTEM. 53.9% (14/26) were positive for one or both genes and 71.4% (10/14) were identified as Escherichia coli. On the other hand, 148 and 119 isolates of Staphylococcus spp. were identified from cows and goats, respectively. for the study of the phenotypic profile of antimicrobial resistance using the technique of diffusion in agar with the discs of antibiotics: penicillin (10 UI), tetracycline (30 μg), cefoxitin (30 μg), erythromycin (15 μg ), Clindamycin (2 μg) and ceftiofur (30 μg). In bovine isolates, a significant frequency of resistance to penicillin (52.0% [77/148]) was observed, followed by tetracycline (10.1% [15/148]), and none of the isolates was resistant to ceftiofur. Regarding the genetic determinants of resistance, the most observed pattern was the presence of the blaZ gene (40.5% [60/148]) and the tetK gene (22.3% [22/148]). In isolates from goats, the same pattern of resistance was observed as in isolates from cows, with a frequency of resistance to penicillin and tetracycline of 45.0% (53/119) and 30.3% (36/119), respectively. Regarding the resistance genes, a higher frequency of the blaZ gene was observed with 50.4% (60/119) followed by tetK with 45.0% (53/119). In Staphylococcus spp. of both species, the D - test was performed to identify strains capable of inducing resistance to lincosamides and streptogramin, using discs of erythromycin (15 μg) and clindamycin (2 μg). In the isolates of Staphylococcus spp from cows, 0.7% (1/148) were positive D-test, 7.4% (11/148) were resistant to MLS, 1.4% (2/148) were resistant only to to MS (D – negative test) and 2.7% (3/148) were resistant to clindamycin (L+). For isolates from goats, 3.4% (4/119) D-test positive were obtained, 0.8% (1/119) were resistant to MLS and 0.8% (1/119) were L+. These results demonstrate the circulation of antimicrobial resistant strains in the agricultural system of the state of Pernambuco, representing a risk to animal and public health. |
Palavras-chave: | Resistência antimicrobiana Staphylococcus Enterobacteriaceae Leite Bovino Caprino |
Área(s) do CNPq: | CIENCIAS AGRARIAS::MEDICINA VETERINARIA |
Idioma: | por |
País: | Brasil |
Instituição: | Universidade Federal Rural de Pernambuco |
Sigla da instituição: | UFRPE |
Departamento: | Departamento de Morfologia e Fisiologia Animal |
Programa: | Programa de Pós-Graduação em Biociência Animal |
Citação: | ORTEGA SIERRA, Tania Alexandra. Determinantes genéticos de resistência a antimicrobianos em Staphylococcus spp. e bactérias da família Enterobacteriaceae isolados de leite de vacas e cabras com mastite subclínica em ecossistemas agropecuários do Nordeste brasileiro. 2023. 86 f. Tese (Programa de Pós-Graduação em Biociência Animal) - Universidade Federal Rural de Pernambuco, Recife. |
Tipo de acesso: | Acesso Aberto |
URI: | http://www.tede2.ufrpe.br:8080/tede2/handle/tede2/9683 |
Data de defesa: | 24-Fev-2023 |
Aparece nas coleções: | Doutorado em Biociência Animal |
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